FITC-胰蛋白酶 FITC-Trypsin 熒光標(biāo)記胰蛋白酶
產(chǎn)品名稱:FITC-胰蛋白酶 FITC-Trypsin 熒光標(biāo)記胰蛋白酶
產(chǎn)品描述:
FITC-胰蛋白酶 FITC-Trypsin 熒光標(biāo)記胰蛋白酶
產(chǎn)品概述
FITC-胰蛋白酶(FITC-Trypsin) 是一種將綠色熒光素異硫氰酸酯(FITC, Fluorescein Isothiocyanate)共價(jià)標(biāo)記于胰蛋白酶分子上的生物活性酶制劑。通過 FITC 的熒光標(biāo)記,胰蛋白酶不僅保留其原有的蛋白水解活性,同時具備了可視化追蹤功能,適合在生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子成像研究中進(jìn)行酶活性分析、細(xì)胞內(nèi)定位及動力學(xué)研究。
胰蛋白酶是一類來源于牛胰腺的絲氨酸蛋白酶,其主要功能是水解蛋白質(zhì)中的肽鍵,尤其對賴氨酸和氨酸殘基附近的肽鍵具有高度特異性。FITC 標(biāo)記后的胰蛋白酶通常呈現(xiàn)明亮的綠色熒光,在 495 nm 激發(fā)光下發(fā)射 520 nm 左右的熒光信號,可通過熒光顯微鏡、熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。
化學(xué)結(jié)構(gòu)與標(biāo)記原理
FITC-胰蛋白酶的核心是胰蛋白酶蛋白分子,其中 FITC 的標(biāo)記主要通過異硫氰酸基團(tuán)與蛋白分子中的 賴氨酸 ε-氨基 或 N 端氨基形成穩(wěn)定的 硫脲鍵。
標(biāo)記后的化學(xué)特性包括:
分子量略高于原酶,因 FITC 分子附加約 389 Da;
溶解性良好,通常溶于水或緩沖液(如 PBS, pH 7.4);
穩(wěn)定性高,可在 4℃ 避光保存數(shù)月;
熒光性質(zhì)穩(wěn)定,可耐中性及輕微酸堿環(huán)境,便于多種實(shí)驗(yàn)條件下的應(yīng)用。
產(chǎn)品規(guī)格
常規(guī)提供規(guī)格包括:
濃度范圍:0.1–1 mg/mL,依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求可稀釋;
儲存條件:4℃ 避光,短期可保持活性;長期建議凍存于 -20℃;
緩沖體系:一般為 PBS 或 Tris 緩沖液,含少量甘油或 BSA 以穩(wěn)定酶活;
包裝形式:凍干粉或液體凍存,便于實(shí)驗(yàn)室使用。
功能特點(diǎn)
雙重功能:既保持胰蛋白酶的蛋白水解活性,又具備可視化熒光追蹤能力。
高靈敏度檢測:FITC 熒光可在低濃度下檢測,適合微量樣品分析。
廣泛兼容性:可應(yīng)用于生物大分子水解實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞內(nèi)蛋白酶動力學(xué)、蛋白質(zhì)定位等。
易操作性:標(biāo)記穩(wěn)定,不易自發(fā)漂白,可在常規(guī)生物化學(xué)條件下使用。
低背景干擾:綠色熒光信號清晰,可與紅色或近紅外熒光染料組合,實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。
主要應(yīng)用方向
1. 蛋白水解研究
FITC-胰蛋白酶可直接參與蛋白底物水解實(shí)驗(yàn),通過熒光信號變化監(jiān)測酶活性。例如,通過 FITC 標(biāo)記的底物或酶底物體系可實(shí)現(xiàn)高通量酶動力學(xué)分析。
2. 細(xì)胞生物學(xué)與細(xì)胞內(nèi)追蹤
由于熒光標(biāo)記特性,F(xiàn)ITC-胰蛋白酶可用于追蹤細(xì)胞攝取與內(nèi)化過程,研究蛋白酶在溶酶體、胞內(nèi)信號通路中的作用及其動力學(xué)分布。
3. 熒光免疫學(xué)與標(biāo)記實(shí)驗(yàn)
可作為熒光探針與其他分子偶聯(lián),分析蛋白酶與特定受體或*體的結(jié)合行為,應(yīng)用于免疫標(biāo)記、組織切片熒光成像等實(shí)驗(yàn)。
4. 藥物與酶抑制劑篩選
FITC-胰蛋白酶可用于體外藥物篩選實(shí)驗(yàn),通過熒光強(qiáng)度變化快速評估酶抑制劑的作用效率。
使用注意事項(xiàng)
光敏性:FITC 熒光素對光敏感,操作和存儲過程中應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
pH 適應(yīng)性:適宜在中性緩沖條件下使用(pH 7–8),過酸或過堿環(huán)境可能影響酶活及熒光性質(zhì)。
凍融循環(huán):盡量避免多次凍融,可分裝以維持活性和熒光信號。
濃度控制:實(shí)驗(yàn)中應(yīng)根據(jù)檢測方法合理稀釋,避免熒光淬滅或酶過量引起的非特異水解。
安全防護(hù):作為蛋白質(zhì)酶制劑,應(yīng)佩戴手套和護(hù)目鏡,防止皮膚接觸或吸入粉塵。
小結(jié)
FITC-胰蛋白酶是一種兼具 蛋白酶活性 與 熒光可視化功能 的高性能生物試劑,適用于多種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,包括酶動力學(xué)分析、細(xì)胞內(nèi)追蹤、蛋白質(zhì)相互作用研究及藥物篩選等。其標(biāo)記穩(wěn)定、操作方便、信號清晰的特點(diǎn),使其在基礎(chǔ)研究和生物技術(shù)應(yīng)用中具有重要價(jià)值。通過合理設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)條件,F(xiàn)ITC-胰蛋白酶能夠?yàn)榭蒲刑峁┛煽?、直觀的熒光信號和定量數(shù)據(jù),成為現(xiàn)代生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究中的優(yōu)選工具。
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