產(chǎn)品名稱：CY5-3-IAA CY5標記3-吲哚乙酸 熒光標記3-吲哚乙酸

產(chǎn)品描述：

CY5-3-IAA CY5標記3-吲哚乙酸 熒光標記3-吲哚乙酸

一、產(chǎn)品概述

CY5-3-IAA 是一種以植物生長激素 3-吲哚乙酸（Indole-3-acetic acid, IAA） 為核心分子，通過共價連接高熒光素 Cy5（Cyanine 5） 而構(gòu)建的熒光標記化合物。通過引入 Cy5 熒光基團，使 IAA 分子具備強熒光信號，可用于細胞成像、生物分子相互作用研究、受體結(jié)合分析、代謝追蹤等生命科學科研領(lǐng)域。

3-吲哚乙酸是典型、重要的天然植物生長素（auxin），在植物體內(nèi)參與細胞伸長、分化、分枝、重力感應、光響應等多種生長過程。CY5 標記后的 IAA 保持了其生物活性基礎(chǔ)，同時具備熒光可視化的特性，為研究 IAA 在細胞與組織中的定位、轉(zhuǎn)運路徑、受體結(jié)合及信號傳導機制提供了大便利。

二、分子結(jié)構(gòu)及特性

CY5-3-IAA 的分子結(jié)構(gòu)主要由以下兩個部分組成：

3-吲哚乙酸（IAA）部位

該部分為天然植物激素結(jié)構(gòu)，含有吲哚環(huán)和乙酸側(cè)鏈，具有典型的 auxin 活性。

Cy5 熒光基團

Cy5 屬于 cyanine 類熒光染料，具有如下特性：

激發(fā)波長約 646 nm

發(fā)射波長約 662–670 nm

高量子產(chǎn)率、強熒光信號

在紅/近紅外區(qū)域發(fā)射，背景低、穿透好

通過化學合成將 Cy5 分子與 IAA 分子通過穩(wěn)定的共價鍵連接，使熒光基團與生物活性分子共存。

三、主要生物化學性質(zhì)

性質(zhì) 描述

外觀 深藍色至紫色粉末或凍干粉

溶解性 可溶于 DMSO、DMF，微溶于水（推薦先溶于 DMSO 再稀釋）

存儲條件 建議 -20 °C 避光保存

激發(fā)/發(fā)射 646 / 662–670 nm（近紅外區(qū)）

親和性 保持 IAA 對 auxin 受體的基本結(jié)合能力

穩(wěn)定性 在暗條件、低溫下較穩(wěn)定

四、設計與合成原理

CY5-3-IAA 的合成基于以下關(guān)鍵設計思想：

保持 IAA 的結(jié)構(gòu)完整性

3-吲哚乙酸的吲哚環(huán)與乙酸鏈是其生物活性基礎(chǔ)，標記設計中應盡量避免影響活性位點（如側(cè)鏈的α-碳等）。

引入高亮度熒光基團

選擇 Cy5 是因為其在細胞自發(fā)熒光干擾較低的紅外區(qū)發(fā)射，適合用于細胞、組織深部成像、FACS 及多色熒光實驗。

采取適配性鏈接策略

通常利用 IAA 上可修飾的羧基（-COOH）經(jīng)過活化，與 Cy5 染料上的氨基或其他可反應基團發(fā)生酰胺化反應，生成穩(wěn)定共價銜接。

五、主要應用場景與優(yōu)勢

CY5-3-IAA 作為熒光標記植物激素衍生物，在以下科研領(lǐng)域具有重要應用價值：

1. 植物細胞定位與轉(zhuǎn)運研究

借助 Cy5 的熒光，可在共聚焦顯微鏡下直觀觀察 IAA 在細胞、器官中的分布與動態(tài)變化，從而深入理解 auxin 在性運輸、細胞分化區(qū)域的分布特點。

2. 受體結(jié)合分析

通過熒光強度變化、共聚焦定位、FRET 或 SPR 等生物物理技術(shù)，檢測 CY5-3-IAA 與植物細胞 auxin 受體（如 TIR1/AFB 等）的結(jié)合親和力、動力學以及競爭機制。

3. 熒光定量追蹤與顯微成像

在活體或固定樣本中利用紅外熒光波段成像（減少自發(fā)熒光干擾），準確、實時地跟蹤 hormon 在組織中的分布、積累、降解動力學。

4. 生長素信號通路研究

可結(jié)合基因突變株、藥物處理及受體抑制劑，通過熒光強度差異分析生長素信號通路中關(guān)鍵蛋白的響應過程。

5. 高通量篩選

在 96-孔板、流式細胞術(shù)中利用熒光變化篩選影響 IAA 受體結(jié)合的小分子調(diào)節(jié)劑或抑制劑。

六、使用方法與檢測建議

1. 溶解與配制

將凍干粉溶于 DMSO 制備 1–10 mM 儲備液。

避光操作，分裝保存 -20 °C。

實驗中盡量稀釋至終工作濃度（如 0.1–10 μM）并保證 DMSO 終體積分數(shù) < 0.5%（避免細胞毒性）。

2. 成像參數(shù)建議

激發(fā)：~640–650 nm 激光線

收集發(fā)射：~660–680 nm

建議使用長通濾光片或窄帶濾光片提高信噪比。

3. 對照設置

采用未標記 IAA 對照組

熒光背景對照（不加 CY5-3-IAA）

熒光淬滅、光漂白評估

4. 數(shù)據(jù)分析

常用圖像分析軟件（如 ImageJ、ZEN、Imaris 等）進行強度測量、定位分析與共定位定量。

七、優(yōu)勢總結(jié)

優(yōu)勢類別 說明

信號強度高 Cy5 熒光強、背景低

穿透力好 紅外激發(fā)/發(fā)射減少自發(fā)熒光影響

生物活性保持 保留 IAA 與受體的基本結(jié)合能力

可視化直觀 可直接在顯微鏡下動態(tài)觀察

八、注意事項

光敏感性：CY5 基團對光敏感，操作時盡量避光，防止熒光衰減。

溶解性：直接溶于水可能析出或聚集，推薦先用 DMSO 溶解再稀釋。

細胞毒性：高濃度 DMSO 或標記化合物可能對細胞有一定影響，建議做濃度梯度預實驗。

批次差異：熒光標記效率受合成批次影響，請根據(jù)實驗調(diào)整劑量與檢測條件。

九、典型實驗案例與成果

研究者可參考以下類型工作示例：

CY5-IAA 在擬南芥根尖中的實時追蹤：通過共聚焦顯微鏡，觀察 CY5-IAA 在根尖區(qū)域的性運輸及 PIN 蛋白介導的轉(zhuǎn)運路徑變化。

結(jié)合 FRET 研究 auxin 受體結(jié)合動力學：采用 CY5-IAA 與 GFP-標記的受體進行能量傳遞效率測量，解析結(jié)合親和性與時間過程。

高通量篩選 auxin 調(diào)節(jié)劑：利用 96-孔板熒光讀板器監(jiān)測 CY5 信號強度變化，篩選影響 IAA 結(jié)合的潛在化合物。

十、總結(jié)

CY5-3-IAA 是一種集生物活性與高靈敏熒光檢測能力于一體的高端科研試劑。它不僅保留了天然 3-吲哚乙酸作為植物激素的生物學功能，還通過 Cy5 熒光標簽大幅提升了可視化追蹤與量化檢測性能。無論是在細胞成像、信號通路解析，還是在生物物理結(jié)合分析與高通量篩選中，CY5-3-IAA 都是一種具價值的工具分子，可為植物學、分子生物學、細胞生物學等領(lǐng)域的科研提供強有力支撐。

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