產(chǎn)品名稱：羅丹明B-乳鐵蛋白 RB-Lactoferrin 羅丹明 B 標記乳鐵蛋白

產(chǎn)品描述：

羅丹明B-乳鐵蛋白 RB-Lactoferrin 羅丹明 B 標記乳鐵蛋白

一、產(chǎn)品概述

RB-Lactoferrin（Rhodamine B-Lactoferrin） 是一種將 羅丹明B（Rhodamine B，RB）熒光染料 與天然鐵結(jié)合蛋白 乳鐵蛋白（Lactoferrin, LF） 進行共價偶聯(lián)的熒光標記蛋白。乳鐵蛋白是一種廣泛存在于乳汁及體液中的多功能糖蛋白，具有 鐵離子結(jié)合、*菌、免疫調(diào)節(jié)及*炎 等生物活性。通過將 RB 與乳鐵蛋白連接，RB-Lactoferrin 不僅保留乳鐵蛋白的天然生物功能，還具備 明亮橙紅色熒光信號，廣泛應(yīng)用于 細胞成像、受體介導(dǎo)內(nèi)吞研究、蛋白動力學(xué)及生物材料研究 等領(lǐng)域。

羅丹明B 是一種光穩(wěn)定性強、熒光量子產(chǎn)率高的染料，激發(fā)波長約為 540–560 nm，發(fā)射波長約為 570–590 nm，能夠在復(fù)雜生物體系中提供清晰、穩(wěn)定的熒光信號。通過化學(xué)偶聯(lián)，RB-Lactoferrin 能夠在保持乳鐵蛋白結(jié)構(gòu)與功能活性的同時，實現(xiàn)可視化示蹤，為乳鐵蛋白的研究提供高效工具。

二、分子結(jié)構(gòu)與標記原理

RB-Lactoferrin 的分子設(shè)計主要包括三個功能模塊：

羅丹明B熒光模塊

提供明亮穩(wěn)定的橙紅色熒光信號，用于熒光檢測和成像。

光穩(wěn)定性好，適用于長期實驗觀察。

乳鐵蛋白功能模塊

乳鐵蛋白作為天然鐵結(jié)合糖蛋白，具有高親和力的鐵離子結(jié)合位點。

可與乳鐵蛋白受體（LfR）結(jié)合，被多種細胞攝取，實現(xiàn)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞。

連接模塊（化學(xué)偶聯(lián)）

羅丹明B通過 NHS ester 或異硫氰酸酯形式與乳鐵蛋白的賴氨酸氨基共價結(jié)合，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。

偶聯(lián)過程中通?？刂迫玖吓c蛋白摩爾比，以保證熒光信號與蛋白功能的佳平衡。

這種設(shè)計確保了 RB-Lactoferrin 熒光強度高、蛋白功能保持完整，同時在細胞和體外實驗中具有可靠的追蹤性能。

三、制備方法

RB-Lactoferrin 的制備通常包含以下步驟：

1. 熒光染料活化

將羅丹明B轉(zhuǎn)化為 Rhodamine B-NHS ester 或 Rhodamine B-ITC（異硫氰酸酯）。

活化后的染料可與蛋白分子中的氨基或巰基反應(yīng)形成共價鍵。

2. 偶聯(lián)反應(yīng)

在 PBS 或碳酸鹽緩沖液（pH 7.4–8.5）中，將 RB 活化物與乳鐵蛋白混合。

羅丹明B通過 NHS ester 或 ITC 基團與乳鐵蛋白的賴氨酸氨基形成穩(wěn)定的酰胺鍵，生成 RB-Lactoferrin。

反應(yīng)一般在低溫（4°C）和避光條件下進行，以保證蛋白穩(wěn)定性和熒光強度。

3. 純化

采用 透析、凝膠過濾層析或超濾離心 去除未反應(yīng)染料和小分子雜質(zhì)。

得到高純度的 RB-Lactoferrin，保留蛋白結(jié)構(gòu)完整。

4. 表征

紫外-可見光譜：確認羅丹明B吸收峰（約550 nm）

熒光光譜：發(fā)射峰約在 580–590 nm

SDS-PAGE：檢測蛋白完整性

標記度（DOL）：測定平均每個乳鐵蛋白分子上標記的羅丹明B數(shù)量

通過這些分析，可確保 RB-Lactoferrin 的高質(zhì)量與可靠性能。

四、理化性質(zhì)

激發(fā)波長（Ex）：540–560 nm

發(fā)射波長（Em）：570–590 nm

外觀：橙紅色凍干粉末

溶解性：易溶于 PBS、Tris緩沖液及水溶液

儲存條件：?20℃ 避光

穩(wěn)定性：低溫避光條件下穩(wěn)定，熒光信號可持續(xù)長期使用

RB-Lactoferrin 在水溶液中穩(wěn)定，能夠維持高熒光強度和蛋白功能，適用于各種實驗條件。

五、產(chǎn)品特點

強熒光信號：羅丹明B提供明亮橙紅色熒光，適合高靈敏度檢測。

保留乳鐵蛋白活性：蛋白受體結(jié)合能力及鐵結(jié)合功能保持完整。

適用于多種實驗平臺：流式細胞儀、共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡均可檢測。

高光穩(wěn)定性：*光漂白，適合長時間成像實驗。

高純度與低非特異性吸附：純化后適合體外及體內(nèi)實驗使用。

六、主要應(yīng)用領(lǐng)域

1. 細胞內(nèi)乳鐵蛋白攝取研究

通過乳鐵蛋白受體（LfR）介導(dǎo)的內(nèi)吞，RB-Lactoferrin 可用于研究 細胞攝取動力學(xué)。

在細胞、腦內(nèi)皮細胞及免疫細胞等多種細胞類型中均可使用。

2. 藥物遞送與納米載體研究

RB-Lactoferrin 可作為 靶向蛋白模型，評估乳鐵蛋白修飾的納米載體或藥物在體內(nèi)的分布。

可用于腦靶向遞送研究，因為乳鐵蛋白可跨越血腦屏障。

3. 細胞成像與共聚焦顯微鏡

橙紅色熒光信號可直觀觀察乳鐵蛋白在細胞內(nèi)的分布及轉(zhuǎn)運過程。

4. 生物材料研究

可用于檢測材料表面對乳鐵蛋白吸附行為，以及蛋白-材料相互作用研究。

5. 熒光定量與示蹤

用于乳鐵蛋白動力學(xué)分析、受體結(jié)合實驗和蛋白示蹤實驗，提供定量信息。

七、實驗使用建議

避光操作：操作和儲存需避光，以防熒光衰減。

緩沖液選擇：PBS 或 Tris 緩沖液為佳選擇，避免強還原劑或游離氨基干擾標記。

溫度控制：推薦低溫（4℃）操作，避免蛋白變性。

濃度優(yōu)化：根據(jù)實驗類型調(diào)整工作濃度，確保熒光信號可檢測且蛋白活性不受影響。

分裝儲存：凍干分裝可延長產(chǎn)品壽命，避免反復(fù)凍融。

八、總結(jié)

RB-Lactoferrin（Rhodamine B-乳鐵蛋白） 是一種結(jié)合 天然乳鐵蛋白與羅丹明B熒光染料 的高性能標記蛋白。通過熒光示蹤，研究人員可在細胞及生物體系中觀察乳鐵蛋白的攝取、分布和轉(zhuǎn)運，同時保持蛋白本身的生物活性。

憑借高亮度、光穩(wěn)定性強、蛋白活性保持良好等優(yōu)點，RB-Lactoferrin 廣泛應(yīng)用于 細胞成像、受體介導(dǎo)內(nèi)吞研究、納米藥物遞送、蛋白動力學(xué)及生物材料研究。其在生命科學(xué)研究和納米醫(yī)學(xué)中，是觀察和分析乳鐵蛋白行為的重要工具，為科學(xué)實驗提供了可靠、可視化的解決方案。

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