產品名稱：Cy5-PE Cyanine5-Phycoerythrin Cy5標記藻紅蛋白

產品描述：

Cy5-PE Cyanine5-Phycoerythrin Cy5標記藻紅蛋白

一、產品概述

Cy5-PE（Cyanine5-Phycoerythrin） 是一種將 Cyanine5（Cy5）熒光染料 共價偶聯(lián)到 藻紅蛋白（Phycoerythrin, PE） 分子上的熒光標記蛋白。藻紅蛋白是一種來源于紅藻和藍藻的天然熒光蛋白，具有天然明亮的橙紅色熒光信號，其光學性質穩(wěn)定且量子產率高。

通過 Cy5 的標記，PE 的發(fā)射光譜被延伸到 遠紅光區(qū)（650–670 nm），實現(xiàn)與常規(guī)熒光通道（FITC、PE、PerCP等）的多色聯(lián)合檢測而無顯著光譜重疊，從而大幅提升熒光實驗的通道靈活性。Cy5-PE 常被用于 流式細胞術、多色免疫熒光分析、共聚焦顯微鏡成像以及免疫檢測實驗。

Cyanine5 是一種具有良好光穩(wěn)定性和量子產率的熒光染料，在 約650 nm激發(fā)、670 nm發(fā)射 的條件下可提供穩(wěn)定且明亮的紅色熒光。Cy5-PE 的構建既保留了 PE 的高分子熒光能力，也賦予了遠紅色熒光特性，使其成為多色熒光分析中理想的熒光標記物。

二、分子結構與標記原理

Cy5-PE 的制備基于 Cyanine5 活性酯（NHS ester 或 Maleimide衍生物） 與 PE 蛋白分子上的 賴氨酸氨基 或 巰基殘基 進行共價偶聯(lián)的原理。

藻紅蛋白（PE） 是一種高分子量球狀蛋白復合物，具有多個天然色素結合位點，天然熒光強度高。

Cy5 通過與 PE 的可反應殘基形成共價鍵（如胺基–NHS反應生成穩(wěn)定的酰胺鍵），使染料固定在蛋白分子上。

標記后，Cy5-PE 保留 PE 的天然熒光特性，同時提供遠紅色熒光，可用于多通道聯(lián)合檢測。

標記過程中通常需要控制 Cy5 與 PE 的摩爾比，以保證 熒光信號強度和蛋白活性之間的平衡。過量染料可能導致蛋白聚集或熒光猝滅，而適度標記則可維持高靈敏度檢測。

三、制備方法

Cy5-PE 的制備主要包括以下步驟：

1. Cy5活化

通過將 Cy5 轉化為 NHS ester 或 maleimide 衍生物，使其具有可與蛋白反應的活性基團。

2. 偶聯(lián)反應

將活化 Cy5 與 PE 蛋白在弱堿性緩沖液（如 PBS, pH 7.4–8.0）中混合。

Cy5-NHS 通過與 PE 的賴氨酸氨基形成穩(wěn)定的酰胺鍵，從而將熒光染料固定在蛋白分子上。

反應一般在低溫條件下進行，避免光照，確保熒光穩(wěn)定性。

3. 純化

通過透析、凝膠過濾或超濾去除未反應的 Cy5 分子。

得到純化后的 Cy5-PE，其熒光性能穩(wěn)定，適用于下游實驗。

4. 表征

紫外-可見光譜：確認 Cy5 熒光吸收峰

熒光光譜：測定熒光發(fā)射峰及強度

SDS-PAGE / 免疫電泳：檢測蛋白分子完整性

標記度測定（DOL）：確定每個 PE 分子上的 Cy5 平均標記數量

四、理化性質

激發(fā)波長（Ex）：約 650 nm

發(fā)射波長（Em）：約 670 nm

外觀：深紅色至紫紅色凍干粉末

溶解性：可溶于 PBS、Tris緩沖液及水性溶液

儲存條件：?20℃，避光保存

穩(wěn)定性：在低溫和避光條件下穩(wěn)定，熒光信號持續(xù)性良好

Cy5-PE 在水溶液中保持高熒光強度，適合長時間儲存和重復實驗使用。

五、產品特點

明亮的遠紅色熒光：避免與 FITC、PE 等常規(guī)染料的光譜重疊，適合多色聯(lián)合檢測。

高靈敏度：Cy5-PE 的高熒光量子產率提供可靠信號，可用于低豐度標記分析。

保留天然蛋白功能：PE 的蛋白結構保持完整，可在免疫檢測或受體結合實驗中使用。

多用途：適用于流式細胞術、免疫熒光、共聚焦成像等多種熒光實驗。

光穩(wěn)定性強：Cy5 熒光耐光照、信號衰減慢，實驗可靠性高。

六、主要應用領域

1. 流式細胞術（FACS）

Cy5-PE 可作為 免疫標記*體的熒光二級探針，實現(xiàn)多色分析。

適用于細胞表面*原定量分析、淋巴細胞分型和免疫監(jiān)測。

2. 共聚焦顯微鏡與熒光成像

可用于觀察 PE 蛋白在細胞或組織中的分布。

遠紅色信號可與 FITC、Cy3 等通道聯(lián)合成像，實現(xiàn)多色熒光分析。

3. 多色免疫分析

在多重免疫熒光實驗中，Cy5-PE 能與其他熒光標記物組合，提高檢測靈活性。

4. 熒光定量與示蹤

適用于蛋白動力學、受體介導內吞、細胞攝取研究。

可用于追蹤生物體系中的蛋白分布和降解過程。

5. 生物醫(yī)學研究與藥物

用于納米遞送系統(tǒng)、免疫診斷試劑及蛋白藥物示蹤研究。

七、實驗使用建議

避光操作：Cy5-PE 對光敏感，操作及儲存應避光。

緩沖液選擇：建議使用 PBS 或 Tris，避免含游離氨基的緩沖液。

溫度控制：實驗中保持 4℃ 或室溫，避免蛋白變性。

濃度優(yōu)化：根據實驗需求調整熒光探針濃度，確保信號清晰且蛋白功能不受影響。

分裝儲存：凍干分裝可延長使用壽命，避免反復凍融。

八、總結

Cy5-PE（Cyanine5-藻紅蛋白） 是一種結合 天然藻紅蛋白與遠紅熒光染料 Cy5 的高性能熒光標記蛋白。通過 Cy5 的標記，PE 的天然熒光特性被擴展到遠紅區(qū)，實現(xiàn)多通道聯(lián)合檢測，信號明亮且穩(wěn)定。

其廣泛應用于 流式細胞術、多色免疫熒光、共聚焦成像、蛋白追蹤以及納米載體研究 等領域，為生命科學研究提供了可靠且靈活的熒光工具。憑借高光穩(wěn)定性、高量子產率和多色兼容性，Cy5-PE 成為多色熒光實驗和生物醫(yī)學研究中不可或缺的標記蛋白之一。

西安齊岳生物科技有限公司提供專業(yè)的熒光標記服務與定制解決方案，致力于滿足科研與應用領域對高性能熒光標記產品的需求。公司可針對蛋白質、肽、多糖、小分子化合物以及納米材料進行高效、穩(wěn)定的熒光修飾，涵蓋從可見光到近紅外 NIR）范圍的多種熒光染料，如FITC、Cy3、Cy5、Cy5.5及Cy7等。

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